1、底物污染
ELISA试剂盒确保在使用前，底物不被金属离子或氧化剂污染；在实验时留存一些额外的底物，底物本身不应该有颜色。
2、不正确的洗涤
洗涤不充分或省略洗涤步骤中的任何一步均会导致背景色过高。
解决方法：检查洗涤缓冲液的体积并确保完成所有的洗涤步骤；确保洗涤缓冲液的正确稀释和正确使用。
3、底物曝光
底物曝光会使底物变成蓝色，因此在加入板内之前要保存在暗处(即试剂瓶内)。
4、错误的孵育时间和温度
必须严格按照产品说明书来定孵育时间和温度。
5、HRP的错误稀释
HRP浓度过高会造成高背景色，因此要严格按照产品说明书稀释。
6、包被板保存不当
ELISA试剂盒如果包被板只用了一部分，一定要正确保存剩余的板条。
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