制备高特异性、高效价的抗体是实验免疫学技术的基础,抗体质量的高低将直接影响实验的胜败。经过不同办法制备的抗体往往与多种杂蛋白稠浊在一起,为了取得成分相对单一的抗体或将抗体用于特定的用处,就需要对抗体进行纯化。今天我们就来介绍一下抗体纯化的方法,依据抗体的用处将纯化分了以下几种类型:
1、粗纯:将制备抗体的血清或是腹水,细胞上清,直接用盐析法进行处理,这样能够将这些物质里边的其他杂质去掉,取得蛋白的成分,但是由于是粗纯,里边会混有大量的其他蛋白,这样取得的抗体,纯度较低,经常用于实验中的布景。
2、通用型纯化:用抗体结合蛋白Protein A,Protein G或者Protein L。因为不同来源的抗体和这些抗体结合蛋白的结合才能不同,所以需要依据抗体来源挑选运用哪种抗体将结合蛋白。对于有一些单链抗体,通常运用protein L来进行纯化。经过抗体结合蛋白的亲和纯化后,溶液中只保留了抗体的成分,其他蛋白都去掉了,所以抗体纯度比较高。
3、抗体特异型纯化:但是有些抗体,需求纯度特别高,特异性特别好,就不能简略选用上述两种办法进行纯化了。必须要经过将抗原固定制备成特异的亲和纯化柱,再纯化抗体。这个时候得到的就是针对一种抗原的抗体了。
以上就是ELISA实验中抗体纯化的方法,纯化是ELISA实验中的重要步骤,大家在实验中一定要多加注意。
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